皮肤致敏—封闭贴敷法试验简介

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本文转载自 海河标测

● 前    言 ●

皮肤致敏试验常用的测试方法为：豚鼠最大剂量法（GPMT）、封闭贴敷法（Buehler试验）、局部淋巴结实验法（LLNA），本篇文章为大家介绍封闭贴敷法（Buehler试验）。

首先为大家介绍一下皮肤致敏试验的作用机理。皮肤致敏即变应性接触性皮炎，是免疫介导的对某种反复接触性物质的皮肤反应，具有致敏作用的化学物经一定途径作用于机体，与组织蛋白结合形成完全抗原，使体内免疫活性细胞对其产生特异性免疫反应，产生淋巴细胞或体液抗体；经过1~2周的致敏期，使体内免疫得到充分发展，形成一定数量的淋巴细胞或特异性抗体，当机体再次接触此化学物时，则出现过敏反应。致敏反应表现为瘙痒、红斑、水肿、丘疹、大（小）水泡等。所以医疗器械的致过敏性需要受到大家的关注，本文章所介绍的封闭贴敷法致敏试验适用于直接与皮肤表面接触的样品，例如：敷料贴、绷带、电极、耦合剂等。

试验目的

通过豚鼠皮肤致敏—封闭贴敷试验评估样品造成豚鼠皮肤致敏反应的潜在性。

样品制备方法

表1  样品制备

样品形态	方    法
浸提液	使用2.5*2.5 cm纱布块吸附饱和样品浸提液作为测试组。
固体	片状材料和薄膜应不加改变直接用于试验，制成2.5*2.5 cm的样品作为测试组。
液体	液体样品应不加稀释进行试验。如果直接试验不可行，可采用适当溶剂稀释后试验。将液体吸附饱和于2.5*2.5 cm纱布块作为测试组。
粉剂	粉剂可以直接附着，或使用适当的溶剂调成糊状物质后，均匀涂抹于2.5*2.5 cm纱布块上，作为测试组。
胶体	将胶状样品（如耦合剂）均匀涂抹于2.5*2.5 cm纱布块上，作为测试组。

测试方法

将检测样品贴敷于每个实验动物（总计10只）的左上背部，再用封闭性包扎带固定（6±0.5）小时，随后除去固定物和敷贴片。1周连续3天重复该步骤，同法操作3周。对照组动物（总计5只）使用无菌医用纱布块作为检测样品同法操作。在最后一次诱导敷贴后14天用检测样品对全部实验动物和对照动物进行激发，将检测样品贴敷于每只实验动物去毛的未测试部位，如右下背部，（6±0.5）小时除去固定物和敷贴片。激发后（24±2）小时后被毛，被毛后至少2小时记录所有敷贴部位的得分，激发后（48±2）小时再进行评分（见表2）。

表2  Magnusson和Kligman分级

敷贴试验反应	等 级
无明显改变	0
散发性或斑点状红斑	1
中度融合性红斑	2
重度红斑和/或水肿	3

结果评价

按 Magnusson和Kligman分级标准，对照组动物等级小于1，而测试组中等级大于或等于1时一般提示致敏；如对照组动物等级大于或等于1时，试验组动物反应超过对照组中最严重的反应则认为致敏。

阳性测试

为了确保试验的再现性和敏感性，应进行阳性对照物试验，以验证试验系统并证实阳性反应。那么阳性试验该怎么进行呢？下面为大家介绍阳性测试需注意关键点：

1）阳性对照需每6个月做一次；

2）阳性对照品为质量体积比为0.1%二硝基氯苯DNCB，对照溶剂为无水乙醇；

3）动物数量为5只实验组和5只对照组；

4）其他步骤与测试相同。